HLJ/18-7GD免疫有效阻断低致死自然变异株水平传播
弱毒疫苗实验室研究和产品中间试剂
第一阶段田间试验包括育肥猪、母猪及野猪安全评价环境释放试验和针对商品育肥猪的安全性、有效性临床试验。
2020年3月23日农业农村部批准在3省区开展第一阶段临床试验。黑龙江、河南和新疆三个封闭基地开展首期临床试验，先后入组2962头育肥仔猪，分别于4月6日、5月10日和6月8日启动免疫。大庆肇州31-37日龄育肥猪1060头，4月6日首免；洛阳孟津39-47日龄育肥猪562头，5月10日首免；石河子150团37-43日龄育肥猪1340头，6月8日首免。商品育肥猪3000余头，能繁母猪28头及其分娩仔猪家杂野猪25头均严格生物安全隔离，不得销售或利用，全部无害化处理。
第二阶段田间试验是育肥猪、母猪生物安全生产性试验和商品猪的安全性、有效性临床试验。
2020年8月20日农业农村部批准进入生物安全评价生产性试验阶段。黑龙江省两个封闭试验基地先后入组3400头育肥仔猪及201头怀孕母猪，自10月3日起先后注苗，开展田间环境下的生物安全生产性试验。黑龙江省肇州市及牡丹江市生物安全生产性试验10月3日首免。
2020年9月18日农业农村部批准在3省区开展第二阶段临床试验黑龙江、河北和湖北等四个临床试验封闭基地开展第二阶段临床试验，先后入组7900、2020和1970头育肥仔猪，分别于10月4日、10月18日和10月18日启动免疫。大庆肇州和双城31~37日龄育肥猪7900头，10月4日首免（哈兽研ABSL-3攻毒评价）；河北巨鹿基地37~43日龄育肥猪2020头，10月18日首免（中国ACDC ABSL-3攻毒评价）；河北武汉基地39~47日龄育肥猪1970头，10月18日首免。商品育肥猪3000头能繁母猪200头及其生产仔猪均严格生物安全隔离，不得销售或利用，全部无害化处理。
结果表明第一阶段临床试验攻毒保护效力：
单剂量（5.0lg）一次接种，2个月后攻毒存活保护50%左右；
单剂量（5.0lg）两次接种，2个月后攻毒存活保护80%以上；
10倍剂量（6.0lg）一次接种，2个月后攻毒存活保护80%以上。
核酸检测qPCR方法调整
步志高所长表示对非洲猪瘟病毒核酸检测方法需要进行调整，目前所有样品编盲，重复采集三份，GCP中心检测、留样各一份，中检所平行检测一份。步志高所长指出目前需要围绕新剂量标准补充质量研究资料尤其是对其安全性和有效性。
目前实验表明疫苗对商品育肥猪具有良好的安全性。
团队先后在五省区的8个猪场开展共14487头商品育肥猪的田间试验，分别观测132天至184天。并对田间试验100万余猪次临床观察记录、910头猪2.5万余次体温记录和2100头猪剖检观察记录的数据分析表明：疫苗接种对育肥猪生长无显著影响，未观察到因疫苗接种引起的明显临床异常及病理损伤。
在第一阶段育肥猪临床试验中，疫苗接种猪及其同居猪平均死淘率为2.6%，对照组猪平均为1.8%。
第二阶段育肥猪临床试验中，疫苗接种猪及其同居猪平均死淘率为13.4%，对照猪为14。1%。
结果表明：疫苗接种猪和同居猪的死淘率与对照猪无显著差异。
试验猪群的猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的混合感染普遍，继发细菌性疾病情况复杂。临床试验猪群的总体死淘率与相同来源仔猪、相似养殖环境场猪群的平均水平相当。疫苗接种组和同居组与对照组无显著性差异，表明疫苗接种对猪群死淘率无影响。
随机选取850头育肥猪定期称重监测疫苗接种后体重增长情况。疫苗接种后4个月，免疫猪、同居猪和对照猪平均体重分别为111.0±10.9kg、113.3±9.7kg和109.9±11.2kg，平均日增重分别为0.81±0.10kg、0.83±0.08kg和0.80±0.10kg。免疫接种猪、同居组猪及对照猪之间无显著性差异，表明疫苗接种对育肥猪生产性能无影响。
按照试验方案，疫苗接种后至出栏前，定期采集试验猪抗凝血液、口肛拭子及剖检组织样品60000余份，检测疫苗毒核酸。疫苗接种后在育肥猪体内呈低水平复制，可在部分免疫猪口肛拭子中检测到疫苗病毒核酸，主要在接种后5周内，无持续排毒。
田间试验中，疫苗以0.1-10倍剂量共接种11880头商品育肥猪，接种后分别观测132天至184天不等，未观察或检测到疫苗毒株毒力返强。疫苗接种后定期采集血清样品7500余份，检测非洲猪瘟及其他5种重要猪病原共8种特异抗体。
疫苗接种后第1、2和3个月，非洲猪瘟疫苗特异抗体转阳率分别为69.1%(661/957)、80.6%(684/849)和93.0%(824/886)。单剂量和10倍剂量同居猪(与疫苗接种猪同圈混养的未接种猪)同居饲养1、2和3个月抗体转阳率分别为0%(0/204)、1.2%(2/172)和4.4%(8/180)。
疫苗接种猪同舍饲养的未接种疫苗对照猪以上3个时间点均未检测到抗体转阳(0/429) 。结果表明，疫苗传播能力低，无连续水平传播能力。非洲猪瘟弱毒疫苗接种对猪瘟、猪蓝耳病、口蹄疫、伪狂犬和圆环病毒等其它常规疫苗接种免疫效果无干扰。
免疫育肥猪对强毒致死攻击提供有效保护。
田间试验期间，免疫接种育肥猪先后8次分别转运至哈兽研和中国动物CDC的生物安全实验室，采用非洲猪瘟强毒致死攻击保护试验。结果，存活保护率82.6%至100%，平均89.3%(143/160)；单剂量—次接种保护持续期2个月以上。
步志高所长表示弱毒苗对母猪及生产仔猪健康和生产性能无影响。
团队先后在黑龙江北安市和牡丹江市的2个猪场开展能繁母猪农业转基因生物安全评价环境释放试验和生产性试验，分别设单剂量接种组、10倍剂最接种组及未接种对照组。疫苗接种后，环境释放试验28头母猪观察了183天，生产性试验201头母猪已观察217天。疫苗接种母猪后未观察到慢性或急性临床不良反应，生长状况良好，发情与受孕及胚胎发育正常
疫苗接种母猪流产率为1.23%，单胎平均产仔数及健仔率分别为11.587.3%;对照母猪的流产率为2.56%;单胎平均产仔数及健仔率分别为11.6及87.6%；疫苗接种组与对照组相比无显著性差异，与提供试验母猪场同期的另外5O4头母猪相当。目前生产性试验母猪免疫后第二胎试验仍在继续进行中。
生产性试验中，随机选取测定901头仔猪出生重，760头仔猪断奶重。疫苗免疫组母猪产仔猪与对照组母猪产仔猪相比均无显著性差异。
生产性试验中，随机选取单剂量接种母猪18胎和10倍剂量母猪7胎的新生仔猪，每胎随机选取3头剖检，检测血液和组织中疫苗毒核酸。结果阳性仔猪比例单剂量母猪组为11.1%(6/54)，10倍剂量组母猪组为19.0%(4/21)，阳性仔猪主要来自妊娠中后期接种母猪。
进一步对新生仔猪血液、口肛拭子和脏器样品等进行跟踪监测，结果表明，疫苗毒在仔猪出生后2个月内均被机体有效清除。
环境释放试验母猪分娩仔猪随机选取30头观察至142日龄。生产性试验母猪分娩仔猪23窝共219头已观察至127日龄。临床表现，统计分析结果显示死淘率、增重等指标均无异常。疫苗接种对繁殖母猪发情、受孕、妊娠无影响；对母猪产仔数、健仔率及仔猪出生重、断奶重等生产指标无影响。
初步可得出如下结论：
1. 通过实验室1100余头SPF猪安全性和有效性实验研究，以及田间14487头商品育肥猪和229头能繁母猪试验，已有的数据表明，非洲猪瘟弱毒疫苗(HLJ/18-7GD株)遗传稳定，接种后不致病、不返强，对育肥猪生长发育、增重和死淘等无不良影响；对田间商品猪存活保护率80%以上。
2. 对接种母猪繁殖性能无明显影响，对分娩仔猪健康状况及生产性能无明显异常。鉴于繁殖母猪生产利用周期长达3-5年，疫苗接种的持续影响有待进一步观测。
3. 大规模生产工艺可行，质量可控，成本经济，已具备生产应用条件。
步志高所长提到，哈兽研全资下属维科生物技术公司的建成非洲猪瘟疫苗生产线，2020年9月30日通过兽药GMP静态验收。按照农业农村部部署要求，依据疫苗制造及检验试行规程，顺利完成94万瓶，3000余万头份的生产储备。
步志高所长在会议中建议疫苗限用于全进全出商品育肥猪。暂不用于繁殖用的母猪及种公猪。
最后步志高所长在会议中表示要实现的既定目标：
安全性达到活苗应有标准
能有效提供强毒攻击保护
大规模生产工艺高效可行
公共产品具有成本经济性
步志高所长强调，要高度重视、积极推进非洲猪瘟疫苗研发工作，坚持尊重科学规律，坚持时间服从质量，严格按照程序开展研发工作，确保疫苗的安全性、有效性，确保经得起科学和实践检验，为生猪产业健康发展作出贡献。
坚持科学，只争朝夕。
要充分认识疫苗研发对我国生猪生产的重要性，按照时间服从质量、稳妥有序推进的要求开展研发工作，力争早日投入生产应用。
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